细胞培养操作步骤：

1.吸走多余培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；

2.吸干净PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰-酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；

（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞*漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）

3.加入6-8ml*培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；

4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；

传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。

注意事项：不同品牌胰-酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。