本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠一氧化氮（NO）水平。用纯化的大鼠一氧化氮（NO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮（NO），再与HRP标记的一氧化氮（NO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮（NO）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠一氧化氮（NO）浓度。