土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒说明书

                                         微量法100管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：                           

S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤：

1、   分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、  加样表

混匀， 37℃振荡反应1h后，90℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，

10000g 25℃离心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂）

充分混匀，室温静置2min后， 400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-NAG活力计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反总÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：3×10^-4 L；W：样本质量，0.02g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0043x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反总÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：3×10^-4 L；W：样本质量，0.02g。