土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶（S-C1）活性测定

试剂盒说明书

                                          微量法100管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。

测定原理：

采用3,5－二硝基水杨酸法测定S-C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

称取约0.1g新鲜土样或风干土样，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，室温振荡提取30min，然后10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、   分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

混匀，37℃准确水浴2h

混匀， 90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测540nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

S-C1活性计算：

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每g土样每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g；

 b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y = 3.2039x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g。