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鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

简要描述:鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)适用于检测鼻腔、眶下窦、气管或气囊组织、眶下窦和关节渗出物或结膜囊内冲洗物、鼻腔、食 管、气管、泄殖腔和交合器拭子、卵黄囊内表面等样本中的鸡毒支原体,用于鸡毒支原体感染的辅助诊断。

  • 更新时间:2024-06-26
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:776

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10006P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Mycoplasma gallisepticam Detection Kit保存条件-20℃±5℃,避光保存
有效期12个月MG 反应液500μL×2 管
MG 阳性质控品50μL ×1 管酶液50μL×1 管
阴性质控品250μL ×1 管

鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)


商品名称:鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

Name :Mycoplasma gallisepticam Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

【预期用途】

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)是引起鸡慢性呼吸道疾病的主要病原,引起鸡呼吸道粘膜卡他性炎症,造成肉鸡胴体品质下降,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等。MG 是高度传染性病原,可随尘粒、空气和羽毛在鸡群中水平传播,也可随种蛋垂直传播。MG 定植鸡的呼吸道后,导致呼吸道上皮细胞纤毛活动减弱或停滞,引起鸡群继发大肠杆菌感染或鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒感染,引起严重的并发症,导致鸡群死亡率增高,给养鸡业造成严重的经济损失。

本试剂盒适用于检测鼻腔、眶下窦、气管或气囊组织、眶下窦和关节渗出物或结膜囊内冲洗物、鼻腔、食   管、气管、泄殖腔和交合器拭子、卵黄囊内表面等样本中的鸡毒支原体,用于鸡毒支原体感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒对鸡毒支原体基因保守区设计特异性的引物和探针,用荧光 PCR 技术对鸡毒支原体的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染病料的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格

50T/盒

MG 反应液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

MG 阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀禽,从鼻腔、眶下窦、气管或气囊取样,也可吸取眶下窦和关节渗出物或结膜囊内冲洗物;活   禽从鼻腔、食管、气管、泄殖腔和交合器中取样;鸡胚从卵黄囊内表面、口咽和气囊采样。

【保存和运输】

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃以下保存,冻融不超过 3 次。

【使用方法】

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL灭菌离心管中;液体样品,直接取 100μL 提取。

1.2  核酸提取

推荐采用公司生产的核酸提取/或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请    按照试剂说明书进行操作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

MG 反应液

酶液

用量(样本数为 N)

19μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,20μL/管。

3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。


 

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1  将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择

ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3  推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

2min

2

45 cycles

95℃

15sec

60℃

30sec

5.  结果分析判定

5.1  结果分析条件设定(请参照各仪器使用说明书进行设置,以分析 ABI7500 仪器为例)

反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用户可根据实际情况自行调整,Start 值可设在 3~15、End 值可设在 5~20,使阈值线位于扩增曲线指数期,阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线),点击 Analyze 自动获得分析结果。

5.2  结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤40,且曲线有明显的指数增长曲线; 阴性:样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

5.3  质控标准

阴性质控品:无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数增长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

6.  检测方法的局限性

1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1. 所有操作严格按照说明书进行;

2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

3. 反应液应避光保存;

4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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