转基因大豆品系MON87751核酸检测试剂盒

【产品名称】

通用名称：转基因大豆品系MON87751核酸检测试剂盒

Name：Transgenic soybean MON87751 line fluorescent PCR kit

【包装规格】48T/盒

【产品说明】

转基因检测系列产品可针对食品、饲料等样品中转基因成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于转基因大豆品系 MON87751 成分的检测，检出限为 0.01%。

【产品组成】

【适应仪器】

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。

【自备耗材和仪器】

①冰盒；②移液器（0.5-10 μL，10-100 μL，100-1000 μL）及配套灭菌吸头；③灭菌 0.2 mL PCR 管或八联管；

④离心机；⑤涡旋混匀器；⑥金属浴；⑦均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑧电子天平。

【 注意事项】

1.      本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

1） 第一区：试剂准备区。

2） 第二区：样本制备区。

3） 第三区：扩增及产物分析区。

★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2.      实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

3.      严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4.      反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要wan全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30

秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5.      反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6.      不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

【样品处理】

参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》或其他标准处理样品，除了处于食物和（或） 饲料链起始端的农产品和粗加工材料（如粉碎的产品），大多数工业加工的食品经过了物理、化学及酶的处理。这些处理会降低 DNA 的含量及纯度。因此，每一方法的适用性及重复性会随特异样品而异，一种特定的 DNA/提取方法的性质特征依赖于被研究的食品种类。实验室样品的代表性应符合《GB/T 19495.7-2004 转基因产品检测抽样和制样方法》。制备的样本保存待用。

★ 若使用非一次性研磨器研磨样品，一定要che底清洗研磨器并充分干燥后再进行下一份样品的研磨，防止交叉污染。

【实验操作】

1.    试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：

若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算反应液用量（N 个待检样品+1 个空白对照+1 个阳性照），涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2 mL PCR 管中。

2.      模板制备（样本制备区）

建议使用配套植物基因组 DNA/提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。

3.      添加模板（样本制备区，放置于冰盒上进行）

在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 5 μL 模板，顺序为 NG-P、待测样品模板、PG-MON87751-P。涡旋混匀，离心 30 秒，立即进行 PCR 扩增反应。

4.      扩增反应（扩增及产物分析区）

使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。按下列条件设置扩增反应：

5.      基线和阈值设定

基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过空白对照扩增曲线的最高点。

【结果判定】

测试样品检测 Ct 值≥40，曲线为直线或轻微斜线，无“S"型扩增曲线，可判定样品不含有 MON87751 品系或含量低于检出限；

测试样品检测 Ct 值≤36，曲线呈“S"型扩增曲线，可判定样品含有 MON87751 品系；

测试样品检测 Ct 值在 36～40 之间，应调整模板浓度，重做实时荧光 PCR。再次扩增后的样品检测 Ct 值＜40， 则可判定样品含有 MON87751 品系；再次扩增后的样品检测 Ct 值≥40，则可判定该样品不含有 MON87751 品系或含量低于检出限。

★NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S"型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。