牛结节性皮肤病间接ELISA抗体检测试剂盒

仅供兽医体外诊断使用

牛结节性皮肤病（Lumpy skin disease，LSD）是由牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus，LSDV）引起的一种急性或亚急性传染病，使病畜全身被结节覆盖，甚至引发死亡。其暴发会对牛养殖国家造成严重的经济损失。因此，快速检测出感染牛，对于预防病毒扩散和控制疾病传播至关重要。

【检测原理】

在反应板微孔中包被牛结节性皮肤病病毒特异性抗原，待检血清中的特异性抗体与包被抗原特异性结合，形成抗原抗体复合物。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗牛 IgG 抗体，与微孔中的抗原抗体复合物结合。加入 TMB 显色底物后，微孔中结合的 HRP 催化底物反应呈蓝色。颜色反应的深浅与样品中存在的抗牛结节性皮肤病病毒特异性抗体的量成正比。

【试剂盒组成】

【储存条件及有效期】

本试剂盒的储存温度为 2-8°C 。有效期 12 个月。

【自备实验材料】

微量可调移液器及配套枪头 恒温培养箱、计时器、记号笔

酶标仪（含波长 450nm 的滤光片） 去离子水或蒸馏水

洗板机（可选）

【试剂以及样品制备】

洗液 1×：使用前，浓缩洗液应恢复至室温（20～25℃），并摇动，使沉淀溶解（最好在 37℃恒温培养箱中加热 5～10 min）， 然后用蒸馏水作 10 倍稀释（例如：60 mL 的浓缩洗涤液加上 540 mL蒸馏水）混匀，稀释好的洗液 2～8℃可存放 7 日。

【操作步骤】

1.   准备：所有试剂在使用前应先恢复至 15～25℃，通过涡旋振荡器轻振所有试剂混匀；

2.   取出密封的抗原包被板，沿包装袋切口处撕开，记录样品位置；

3.   待检样品稀释：将待检样品用样品稀释液按 1:50 倍稀释（196

µL 样品稀释液中加 4 µL 待检血清样品），阴阳性对照不用稀释；

4.   在 ELISA 包被板上：加入稀释好的样品，100µL/孔，阳性对照血清加 2 孔，100µL/孔；阴性对照血清加 2 孔，100µL/孔； 贴上封板膜；

5.   置 37℃恒温箱中避光孵育 30 min；

6.   小心取掉封板膜，弃去孔中液体。每孔加约 300μL 洗液 1×， 静置 1min 后，弃去洗涤液。洗涤 4 次，最后一次拍干。洗板间隔应避免微孔干燥后在吸水纸上拍干；

7.   在所有孔内加入 100μL 的酶结合物工作液；

8.   置 37℃恒温箱中避光孵育 30 min；

9.   小心取掉封板膜，弃去孔中液体。洗涤 4 次，方法同 6；

10.  将底物 A 液与底物 B 液按 1:1 混合，加入孔中，100 µL/ 孔， 贴上封板膜；

11.  置 37℃恒温箱中避光孵育 10 min；

12.  每孔加入 50μL 终止液，振荡混匀，5min 内在酶标仪 450nm 读数。

【注意事项】

1.        所有实验过程应遵守农业农村部关于牛结节性皮肤病检测相关的规定。

2.       牛结节性皮肤病间接ELISA抗体检测试剂盒仅用于体外诊断使用，应2～8℃冷藏运输。

3.        所有的试剂在使用前应先恢复至18～25℃，用涡旋振荡器振荡混匀。

4.        浓缩洗液10×在低温条件下会产生结晶，使用前要温育使其溶解。

5.        注意防止试剂盒成分的污染，不同批次试剂盒成分不要混用， 不要使用超过有效期的试剂，未用完的反应板条应加干燥剂密封，连同未使用完试剂放回2～8℃保存。

6.        待检血清数量较多时，应先稀释完所有待检血清，再加到反应板上， 使反应时间一致。

7.        底物 A 液和底物 B 液对强光和氧化剂敏感，应避光保存，防止氧化剂污染，对皮肤有刺激性。

8.        样品稀释液、对照血清与酶标抗体中含有微量防腐剂，应防止与皮肤接触。

9.        试验废料、废水等应做无害化处理，以免污染环境。

10.     严格遵守这些条款可以获得理想的结果，特别是液体用量、作用时间和温度必须准确。