人表皮生长因子受体EGFR检测试剂盒

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人表皮生长因子受体（EGFR）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人表皮生长因子受体（EGFR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成

备注：

1.  标准品浓度依次为：20、10、5、2.5、1.25、0.625 ng/mL

2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本-稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

试剂盒性能

1.  检测范围：0.625 ng/mL – 20 ng/mL。

2.  灵敏度：最-低检测浓度小于0.1 ng/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

l  有效期：6个月

l  保存条件：2-8℃

需要而未提供的试剂和器材

1.       酶标仪（450nm）

2.       高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.       37℃恒温箱

4.  蒸馏水或去离子水

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

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