大鼠心脏纤维原细胞
产品名称 :大鼠心脏纤维原细胞
产品货号 :YLK-XB1211h
组织来源 :心脏组织
产品规格 :5×105cells/T25细胞培养瓶
细胞简介:
心脏纤维原细胞分离自心脏组织;心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成,非心肌细胞占细胞总数的70% ,其中90% 以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。纤维细胞是机能不活跃的成纤维细胞。胞体呈梭形,胞质较少,弱嗜酸性,胞核小,染色深。电镜下可见,细胞中粗面内质网和高尔基体均不发达。当组织受损时,纤维细胞可转化为成纤维细胞而参与修复过程。纤维细胞和成纤维细胞是处于不同功能状态的同一种细胞,如在组织损伤后的修复过程中,纤维细胞可转化为功能活跃的成纤维细胞。纤维细胞较小,呈多角形,胞质较少,弱嗜酸性,胞核亦较小,染色较深,电镜下粗面内质网较少,高尔基复合体不发达。
成纤维细胞较大,呈星形或梭形,有突起,细胞核呈卵圆形,染色质稀疏,染色淡,核仁明显,胞质较多。成纤维细胞能合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和蛋白多糖,形成胶原纤维、弹性纤维和网状纤维以及基质成分。心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成,当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子。心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中最常见的细胞,可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质,并且在外伤等因素刺激下,部分纤维细胞可重新转变为幼稚的成纤维细胞,其功能活动也得以恢复,参与组织损伤后的修复。因此,对心肌成纤维细胞的生理学研究成为现代心血管领域研究的一个重点。
质量检测
和记怡情娱乐官网生物实验室分离的该细胞经Vim entin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
培 养 基 : 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 : 每2-3天换液一次
生长特性 : 贴壁
细胞形态 : 成纤维细胞样
传代特性 : 可传3代左右
传代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培养条件 : 气相:空气,95% ;C O2,5%
该细胞体外培养周期有限。建议使用和记怡情娱乐官网生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃温浴1-3min。倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完培终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4) 待细胞贴壁后,培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完培。
3. 细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)。消化完向离心管内加入5ml完培终止消化。
3) 经1000rpm离心5min丢弃上清,用5ml完培基重悬沉淀,接种于新的培养瓶内。
4) 待细胞贴壁后,培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完培(37℃预热)。
5) 原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰/酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和和记怡情娱乐官网联系,详尽告知细胞的具体情况,以便和记怡情娱乐官网的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。