人疱疹病毒7型探针法荧光定量PCR试剂盒

产品名称：人疱疹病毒7型探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Human Herpesvirus Type 7 (HHV-7) Probe qPCR Kit

人疱疹病毒 7 型(Human Herpesvirus-7，HHV-7)是一种从正常人外周血单核细胞分离的新型人类疱疹病毒，在体外对淋巴细胞具有亲和性，该病毒目前还不能确 定与某种疾病直接相关，它可能协同人疱疹 6 型病毒引起儿童的玫瑰疹，或者激活 6 型病毒从而引起相关的疾病。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测人疱疹病毒 7 型的试剂盒，它具有下列特点：

1.    即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.    引物和探针经过优化，灵敏性高。

3.    提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.    特异性高，引物是根据人疱疹病毒 7 型 DNA 高度保守区设计，不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。

5.    既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5

个数量级。

6.    本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7.    本产品只能用于科研。

【试剂组成】

【自备试剂】样品RNA。

【注意事项】

一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2.  用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，

下同。

3.    在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.    换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.    换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.   重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备

7.    如果有 N 个样品待提取，最好设置 N+2 个提取，多出的是 PC（样品制备阳

性对照）和 NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液10μL 再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8.    用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.    在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设

置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

四、数据处理

12.  如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值，再推算出其浓度。

13.  如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 38。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 38 则为阳性。如果在 38-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct

值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。