植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒说明书

微量法100T/96S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。

测定原理：

叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃试管、锡箔纸、丙酮。

试剂组成和配制：   

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。         

测定操作：

1.        称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。

2.        提取液的准备：取240mL蒸馏水和960mL丙酮，充分混匀待用。

3.        加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL玻璃试管。

4.        用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣wan全变白则提取wan全，若组织残渣未wan全变白，继续浸提至其wan全变白。

5.        取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A₆₆₃和A₆₄₅ 。

计算公式：

叶绿素a含量（mg/g 鲜重）=（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×D÷m

叶绿素b含量（mg/g 鲜重）=（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×D÷m

叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×D÷m

V提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g

注意事项：

1.        叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。

2.        一定要浸提至组织残渣wan全变白，否则提取不充分。

3.        用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。

        4.  测定时吸光值超过1，可进行适当稀释。