维生素E（Vitamin E，VE）试剂盒说明书

  微量法100T/48S

测定意义：

维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。

测定原理：

VE还原Fe³⁺为Fe²⁺，Fe²⁺与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、漩涡震荡仪。

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。

试剂三：液体2mL×1支，4℃保存。

试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。

样本处理：

1.        组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至1mL，定至在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。

2.        细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）后在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。

3.        血清：取0.1mL，加0.9mL提取液，漩涡仪混匀上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。                  

测定操作：

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.22x + 0.0065 R² = 0.9978

1. 按照蛋白含量计算

VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×Cpr）

                    = 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×W÷V样总）

                    = 9.09×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照细胞数量计算

VE含量（μg/10⁴ cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）

                    = 9.09×（△A -0.0065）÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷V样×10

                = 90.9×（△A -0.0065）

V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b.       用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.11x + 0.0065 R² = 0.9978

1. 按照蛋白含量计算

VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反总÷（V样×Cpr）

                    = 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V反总÷（V样×W÷V样总）

                    = 18.18×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照细胞数量计算

VE含量（μg/10⁴ cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）

                    = 18.18×（△A -0.0065）÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V反总÷V样×10

                = 181.8×（△A -0.0065）

V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项：

若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。