H₂S含量测定试剂盒说明书

                                         微量法100T/96S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

H₂S是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H₂S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理：

H₂S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H₂S含量。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体16mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体8mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：液体1.5mL×1管，4℃避光保存。

样品处理：

1.        组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.        细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.        血清（浆）：直接测定。

操作表：

1、   酶标仪预热30min，调节波长至665nm。

2、   操作表

H₂S含量计算公式：

用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y = 0.0022x，R² = 0.9988

（1）组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H₂S（nmol/mg prot）=×V反总÷(V样×Cpr)=681.8×ΔA÷Cpr

b.按照样本重量计算

H₂S（nmol/g 鲜重）=×V反总÷(V样÷V样总×W)= 681.8×ΔA÷W

(3) 细胞

H₂S（nmol/10⁴ cell）=×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量(万个)）=681.8×ΔA÷细胞数量（万个）

（2）液体样品H₂S（nmol/mL）=×V反总÷V样= 681.8×ΔA

V反总：反应总体积，0.225mL；V样：反应中样品体积，0.15mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

Z低检出限为1nmol/mL。